Приложение к Приказу от 16.05.2011 г №№ 243-ПР, 56 Правила
Правила отбора и транспортирования материала от больных и подозрительных на заражение людей для исследования на лихорадку западного нила
1.Для предохранения от инфицирования медицинского персонала и пациентов при сборе проб биоматериалов и доставке его в лабораторию необходимо:
- не загрязнять наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб;
- не загрязнять сопроводительные документы (направления);
- свести к минимуму непосредственный контакт пробы биоматериала с руками медицинского работника, собирающего и доставляющего его в лабораторию;
- соблюдать асептические условия для предотвращения инфицирования пациента в процессе выполнения инвазивных мероприятий;
- собирать пробы в стерильную одноразовую посуду;
- транспортировать пробы в переносках или укладках с раздельными гнездами.
2.Для серологического исследования необходимо двукратное взятие крови. Первую пробу берут при первых признаках болезни, при подозрении на ЛЗН, вторую - через 10 - 14 дней после первого забора крови. Кровь забирают в асептических условиях из вены в количестве 5 - 8 мл в стерильную пробирку и закрывают стерильной пробкой.
3.Для вирусологического исследования берут кровь не позднее 5-го дня болезни, в стадии вирусемии.
4.Кровь должна быть доставлена в вирусологическую лабораторию в течение первых 24 ч. с момента взятия в термосе или сумке-холодильнике с холодовыми элементами. Транспортируют кровь при температуре от 0 до 8°С:
Цельную кровь нельзя замораживать, так как это ведет к полному гемолизу. Кровь становится непригодной для серологических исследований и приобретает токсические свойства для лабораторных животных и тканевых культур.
Сопроводительный документ (направление) тщательно упаковывают в полиэтиленовый пакет и прикрепляют к емкости с клиническим материалом.
5.Обработка проб крови для серологического анализа в лаборатории. Кровь центрифугируют в течение 10 - 15 мин. при 2500 об./мин., сыворотку отделяют от осадка и используют для серологических исследований.
6.При посмертной диагностике берут кусочки мозга (из разных отделов), печени и селезенки. Взятый материал помещают в стерильные флаконы с пробками, которые помещают в полиэтиленовые пакеты, завязывают и опускают в термос со льдом.
7.Если материал для выделения вируса может быть доставлен в лабораторию в течение 2 - 4 ч., то достаточно поместить его в термос со льдом при температуре от 0 до 8°С. В лаборатории кусочки тщательно измельчают и готовят 10% суспензию в растворе Хенкса (или в фосфатно-буферном растворе, или питательной среде), поддерживая температуру обрабатываемого материала на уровне 5°С. Суспензию центрифугируют в течение 15 мин. при 2500 об./мин. Прибавляют к надосадочной жидкости пенициллин и стрептомицин по 100 - 200 ЕД/мл и используют ее для заражения белых мышей или клеточных культур.
Если доставка материала требует нескольких дней, то его транспортируют в термосах с азотом или сухим льдом. В этом случае до замораживания нужно отделить сыворотку крови от сгустка.
8.Для проведения ОТ-ПЦР забор плазмы крови и спинномозговой жидкости проводят не позднее 12 дня от начала заболевания. Материал для обследования методом ПЦР (плазма и/или сыворотка крови, СМЖ, образцы других тканей, моча) должен забираться с использованием только одноразовых пробирок и медицинского инструментария с соблюдением правил асептики и храниться при температуре -70°С или в жидком азоте, не допуская его оттаивания до проведения исследования.